外泌體是位于體內的細胞外囊泡。特別是在液體活組織檢查中，如血漿、腦脊液、唾液、尿液、母乳等。它們的大小通常為40-100nm，是體內最小的囊泡。
外泌體的結構：
- 外泌體有一個含有表面蛋白的磷脂雙分子層。這些蛋白質可以均勻地存在于所有的外泌體中，或者根據外泌體釋放的位置而獨特存在。這些表面蛋白有如：CD63，CD9，Alix。
- 外泌體包含蛋白質、RNA和microRNA，偶爾也包含DNA。
外泌體的應用：外泌體在體內有特定的應用，但也可用于其他臨床目的。它們可用于：
（1）免疫調節；
（2）組織再生；
（3）診斷；
（4）生物標記物發現；
（5）基因治療。
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外泌體的純化：有多種方法可以純化外泌體。這些方法包括差速離心（differential centrifugation）、密度梯度超速離心（density-gradient ultracentrifugation）、尺寸排阻（size exclusion）、磁激活（magnetics activated）、基于polymer（polymer-based）、免疫學方法（immunological methods）和微流體（microfluidics）。
痛點：
- 其中一些純化方法不是特異性的，因為它們共同純化外泌體和其他細胞外囊泡。 這意味著當涉及到外泌體內容物的純化時，細胞外囊泡的內容物也將被純化。
例如，如果外泌體沉淀中含有凋亡小體，則凋亡小體中所含的DNA也會隨著外泌體的RNA、microRNA和蛋白質內容物一起被純化。這可能會誤導潛在的分析。
- 這些方法中的大多數都需要花費大量的時間。
例如，基于polymer的方法需要過夜孵育期。
- 其中的一些方法的低通量限制了樣本量，并最終限制了外泌體的多樣性或產量。
- 其中的一些方法需要在外泌體純化之前進行預處理，以及特殊的儀器。
Norgen用于外泌體純化的SiC技術：該純化技術通過調節樣品的pH值來改變外泌體表面蛋白的電荷，使其與碳化硅技術結合。
艾美捷科技作為專業的生命科學領域解決方案供應商，為您推薦獨家代理Norgen Biotek品牌的各種外泌體純化試劑盒。操作快速、靈敏、特異，允許高通量，不需要特殊的儀器或預處理。產品僅限用于科研學術研究用途，不得用于醫療與診斷。
| 產品名稱及描述 | 貨號 | 上樣量范圍 |
| Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Mini Kit | 58300 | 50 μL - 1 mL |
| Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Midi Kit | 58500 | 1 mL - 4 mL |
| Plasma/Serum Exosome Purification and RNA Isolation Maxi Kit | 58600 | 4 mL - 10 mL |
| Urine Exosome Purification and RNA Isolation Mini Kit | 58400 | 250 μL - 1 mL |
| Urine Exosome Purification and RNA Isolation Midi Kit | 58700 | 2 mL - 10 mL |
| Urine Exosome Purification and RNA Isolation Maxi Kit | 58800 | 11 mL - 30 mL |
| Cell Culture Media Exosome Purification and RNA Isolation Mini Kit | 60700 | 5 mL - 10 mL |
| Cell Culture Media Exosome Purification and RNA Isolation Midi Kit | 60800 | 10 mL - 20 mL |
| Cell Culture Media Exosome Purification and RNA Isolation Maxi Kit | 60900 | 20 mL - 35 mL |
| Saliva Exosome Purification Kit | 65300 | Up to 2 mL |
Norgen試劑盒的方法原理：
（1）將引入 ExoC buffer 來調整樣品的pH值，從而改變外泌體表面蛋白質的電荷。
（2）一旦 SiC slurry E 被加入到樣品中，改性的表面蛋白將結合到 SiC 上并形成沉淀顆粒。
（3）由于蛋白質結合的 RNA 也會與 SiC 結合，下一步將從SiC和蛋白質結合的RNA中分離外泌體。 ExoR buffer將被引入沉淀顆粒中，并再次修飾外泌體表面蛋白。
（4）外泌體將從 SiC 中釋放出來，上清液中將包含純化的外泌體。
Norgen的SiC技術用于從外泌體中純化RNA：
（1）一旦外泌體被純化，外泌體的內容物就可以被用來研究了。
（2）Norgen的RNA純化試劑盒也使用SiC技術：
??????①不使用苯酚或氯仿（他們有高度毒性和影響下游分析）；
②靈敏度高，意味著不需要載體RNA（這又會影響下游處理，如測序）；
③沒有大小偏差或GC含量偏差（獨特的）。
（3）注意：由于RNA的濃度較低，因此使用bioanalyzer（低至50 pg）或Norgen自己的定量試劑盒（低至1 pg）進行RNA定量是很重要的，因為它們的檢測限很低。
由于缺乏核糖體RNA，因此RIN值和260:280比值不適用。
額外補充的要點：
（1）在純化外泌體和RNA方面沒有達到預期的產量。產量差異是很大；它取決于細胞的活性、健康狀況、年齡等。RNA產量一般在1-100 pg/μL范圍內。
（2）Norgen試劑盒可以從新鮮或冷凍樣品中純化外泌體。但是，如果您要使用冷凍樣品，不要去除樣品中形成的蛋白質沉淀物這點很重要，因為它會含有外泌體。
（3）優秀文章鑒賞：Human myeloma cell- and plasma-derived extracellular vesicles contribute to functional regulation of stromal cells. Proteomics.?2021?(當您對使用Norgen試劑盒純化的外泌體用于蛋白質組學有疑問時，請參考這篇文章。本文展示了正確的分析方法，并證明從Norgen試劑盒中純化的外泌體可用于蛋白質印跡、質譜、納米顆粒和電子顯微鏡檢查。)
該文章DOI: 10.1002/pmic.202000119
Tips：低豐度RNA的定量
（1）無法使用NanoDrop進行定量。需要其它方法。
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